DNA甲基化修饰在维持正常细胞功能、基因组结构稳定、遗传印记、胚胎发育、及肿瘤和疾病的发生、发展起关键作用。5mC可以导致基因沉默或基因表达水平降低,而5hmC则会导致基因激活或基因表达水平增高,研究表明肿瘤抑癌基因的过甲基化或原癌基因的低甲基化在多种肿瘤中被发现。因此,分析基因组的甲基化水平具有重要的临床意义。
随着分子检测的不断发展,甲基化qPCR检测以及甲基化NGS检测已成为非常普及的检测技术,这两种技术的必经之路就是甲基化转化,甲基化转化从方法学上可分为亚硫酸氢盐转化和酶法转化,近几年,基于DNA甲基化位点的检测试剂盒陆续获批面世。NMPA批准的甲基化检测试剂盒大部分为荧光PCR法,主要原因在于荧光PCR法操作简便,无需在PCR后电泳,且具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点。这些甲基化检测试剂采用的转化方法为亚硫酸氢盐转化法,亚硫酸氢盐转化成为DNA甲基化检测的“金标准”。但是传统的亚硫酸氢盐转化有很多局限性,例如过长的转化时间、严重的DNA损伤、被高估的5mC水平、C-U转化不完全等。